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¿Cuánto tiempo puede almacenar eficazmente una reserva de glicerol a -20 grados Celsius?

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Sé que las reservas de glicerol generalmente se mantienen en un congelador a -80 ° C, sin embargo, hay algunas personas que no tienen acceso a dicho equipo. ¿Cuánto tiempo podría mantener una reserva de glicerol a alrededor de -20 ° C (temperatura típica del congelador doméstico)? Me gustaría crear un nuevo stock antes de que algo salga mal.


Si bien creo que es posible mantener viable un cultivo bacteriano mientras está congelado en una reserva de glicerol a alrededor de -20 ° C, como lo atestigua WYSIWYG, es importante tener en cuenta que su "congelador doméstico típico" puede no ser adecuado para tal objetivo.

Esto se debe a que los congeladores domésticos suelen tener una función de "descongelación automática". Esto hace que se descongele temporalmente para eliminar la escarcha que se condensa de la humedad atmosférica. Si se almacenan materiales sensibles como cepas congeladas de cultivos bacterianos / celulares, esto conduciría a ciclos repetidos de congelación-descongelación que dañarían la viabilidad de las cepas.

Por esa razón, casi todos los congeladores de laboratorio no tienen esa función y, en cambio, deben descongelarse manualmente de forma rutinaria.


Cómo almacenar sus proteínas concentradas

Al igual que los estudiantes de posgrado, las proteínas son sensibles al manejo brusco. Esto es particularmente cierto cuando ellos (¡las proteínas, no los estudiantes!) Se concentran, purifican y almacenan. Hemos cubierto las muchas opciones que existen para concentrar sus proteínas, junto con cómo manejar los extractos de proteínas para mantener sus proteínas a salvo de la degradación.

¡Pero las proteínas pueden degradarse incluso después de haberlas extraído y concentrado! El almacenamiento en sí puede provocar la degradación, agregación e inactivación de las proteínas. Y aunque hay muchas opciones de almacenamiento, cada una tiene sus propias ventajas y desventajas. Por lo tanto, para ayudar a mantener sus proteínas seguras durante el almacenamiento, le daremos una descripción general de las opciones de almacenamiento junto con seis consejos prácticos y rápidos.


Pregunta sobre cultivo bacteriano - (28 / Sep / 2006)

Se inocula un cultivo bacteriano iniciador de 5 ml durante 24 horas. Si quiero detenerme aquí por un tiempo antes de optar por un cultivo / minipreparación más grande, ¿cuánto tiempo puedo mantener este cultivo de 5 ml a 4oC?

si los antibióticos no se han agotado con la incubación de 24 horas, si su técnica estéril está bien y no hay contaminación, si el cultivo de 5 ml está cubierto adecuadamente y si la habitación fría / nevera de 4 grados Celsius está limpia y no produce toneladas de esporas, y nadie vuelca la cultura por el suelo.

El cultivo de 5 ml probablemente durará 1 mes. No lo guardaría por más de 2. (Aunque tengo un compañero de laboratorio que mantiene su cultivo durante 6 meses)

Si desea miniprep para plásmido, puede girar las células y congelar el sedimento a -20 grados. Para mantener el cultivo para subcultivo, estoy de acuerdo con perneseblue, asegúrese de que no haya posibilidad de contaminación.

Si es posible, es mejor que diluya su cultivo iniciador 1/500 o 1/1000 en medio LB selectivo (de acuerdo con su protocolo de preparación midi), crezca durante 12-16 horas. y centrifugue para recolectar células bacterianas en las condiciones establecidas en el protocolo de su kit midi. después de eliminar el sobrenadante, puede congelar su sedimento de células bacterianas a -20 ° C para su uso posterior. aquí es donde suelo parar durante midiprep

para el almacenamiento, lo esparciría en un plato, lo cultivaría O / N, luego lo parafilme y lo pondría a 4 ° C por hasta un mes

cuando se inocula con un cultivo de la noche a la mañana, necesita un crecimiento sano y abundante. No creo que sea prudente dejarlo a 4 ° C durante semanas y luego intentar reutilizarlo. hay una razón por la que usamos cultivos nocturnos para aumentar lotes más grandes.


Detalles de producto

Los kits de etiquetado de anticuerpos Lightning-Link permiten el etiquetado directo de anticuerpos, proteínas, péptidos u otras biomoléculas para su uso en aplicaciones de I + D, descubrimiento de fármacos y desarrollo de kits de diagnóstico (consulte el protocolo para obtener más información).

Nuestro kit de etiquetado de anticuerpos R-PE permite la conjugación directa de R-PE a cualquier biomolécula con un grupo amina disponible. El investigador simplemente pipetea el anticuerpo u otra biomolécula en el vial de Lightning-Link R-PE y lo incuba durante 3 horas.

CaracterísticasBeneficios
Rápido y fácil de usarAhorre tiempo, no se requieren conocimientos especiales
Sin pasos de separaciónRecuperación del 100% - sin pérdida de anticuerpos / proteínas
Se puede utilizar en una amplia gama de aplicaciones.Flexible
LiofilizadoSe envía a temperatura ambiente, larga vida útil.
Totalmente escalable (10 ug a 1 go más)Fácil transferencia de I + D a fabricación
Probado rigurosamente por control de calidadAlta calidad constante, excelente reproducibilidad de lote a lote
Gran cantidad de etiquetas disponibles Flexibilidad experimental
Fiable: casi 300 referenciasUtilizado con éxito en muchos campos de investigación.

La R-Ficoeritrina (R-PE) es una proteína fluorescente de la familia de las ficobiliproteínas, presente en algas rojas y criptofitas. Tiene tres valores máximos de absorbancia de 498, 544 y 566nm (el óptimo dependerá de la aplicación) y tiene un fuerte pico de emisión a 580 nm. RPE está estrechamente relacionado con B-Ficoeritrina (B-PE) y estas son las ficobiliproteínas fluorescentes más intensas que proporcionan una fluorescencia naranja.


Contenido

Aunque aquiral, el glicerol es proquiral con respecto a las reacciones de uno de los dos alcoholes primarios. Por tanto, en los derivados sustituidos, la numeración estereoespecífica marca la molécula con un prefijo "sn-" antes del nombre de la raíz de la molécula. [8] [9] [10]

El glicerol se obtiene generalmente de fuentes vegetales y animales donde se encuentra en triglicéridos, ésteres de glicerol con ácidos carboxílicos de cadena larga. La hidrólisis, saponificación o transesterificación de estos triglicéridos produce tanto glicerol como el derivado de ácido graso:

Los triglicéridos se pueden saponificar con hidróxido de sodio para dar glicerol y sal o jabón de sodio graso.

Las fuentes vegetales típicas incluyen la soja o la palma. El sebo de origen animal es otra fuente. Aproximadamente 950.000 toneladas por año se producen en los Estados Unidos y Europa 350.000 toneladas de glicerol se produjeron por año solo en los Estados Unidos entre 2000 y 2004. [11] La directiva de la UE 2003/30 / EC estableció el requisito de que el 5,75% del petróleo los combustibles serán reemplazados por fuentes de biocombustibles en todos los estados miembros para 2010. Se proyectó en 2006 que para el año 2020, la producción sería seis veces mayor que la demanda, creando un exceso de glicerol. [7]

El glicerol a partir de triglicéridos se produce a gran escala, pero el producto crudo es de calidad variable, con un precio de venta bajo de 2 a 5 centavos de dólar estadounidense por kilogramo en 2011. [12] Puede purificarse, pero el proceso es costoso. Algo de glicerol se quema para obtener energía, pero su valor calorífico es bajo. [13]

El glicerol crudo de la hidrólisis de triglicéridos se puede purificar mediante tratamiento con carbón activado para eliminar las impurezas orgánicas, álcali para eliminar los ésteres de glicerol sin reaccionar e intercambio iónico para eliminar las sales. El glicerol de alta pureza (& gt 99,5%) se obtiene mediante destilación de varios pasos. Es necesaria una cámara de vacío debido a su alto punto de ebullición (290 ° C). [7]

Glicerol sintético Editar

Aunque generalmente no es rentable, el glicerol se puede producir por varias rutas a partir del propeno. El proceso de la epiclorhidrina es el más importante: implica la cloración de propileno para dar cloruro de alilo, que se oxida con hipoclorito a diclorhidrina, que reacciona con una base fuerte para dar epiclorhidrina. Esta epiclorhidrina se hidroliza luego para dar glicerol. Los procesos sin cloro a partir de propileno incluyen la síntesis de glicerol a partir de acroleína y óxido de propileno. [7]

Debido a la producción a gran escala de biodiésel a partir de grasas, donde el glicerol es un producto de desecho, el mercado del glicerol está deprimido. Por tanto, los procesos sintéticos no son económicos. Debido al exceso de oferta, se están realizando esfuerzos para convertir el glicerol en precursores sintéticos, como la acroleína y la epiclorhidrina. [14] (Consulte la sección de productos químicos intermedios de este artículo).

Industria alimentaria Editar

En alimentos y bebidas, el glicerol sirve como humectante, solvente y edulcorante, y puede ayudar a conservar los alimentos. También se utiliza como relleno en alimentos bajos en grasa preparados comercialmente (por ejemplo, galletas) y como agente espesante en licores. El glicerol y el agua se utilizan para conservar ciertos tipos de hojas de plantas. [15] Como sustituto del azúcar, tiene aproximadamente 27 kilocalorías por cucharadita (el azúcar tiene 20) y es un 60% tan dulce como la sacarosa. No alimenta las bacterias que forman una placa dental y causan caries dentales. [ cita necesaria ] Como aditivo alimentario, el glicerol se etiqueta con el número E E422. Se agrega al glaseado (glaseado) para evitar que se endurezca demasiado.

Tal como se usa en los alimentos, la Academia de Nutrición y Dietética de EE. UU. Clasifica el glicerol como un carbohidrato. La designación de carbohidratos de la Administración de Drogas y Alimentos de los EE. UU. (FDA) incluye todos los macronutrientes calóricos, excepto las proteínas y las grasas. El glicerol tiene una densidad calórica similar al azúcar de mesa, pero un índice glucémico más bajo y una vía metabólica diferente dentro del cuerpo, por lo que algunos defensores de la dieta [ ¿Quién? ] aceptan glicerol como edulcorante compatible con dietas bajas en carbohidratos.

También se recomienda como aditivo cuando se utilizan edulcorantes polioles como el eritritol y el xilitol que tienen un efecto refrescante, por su efecto de calentamiento en la boca, si no se desea el efecto refrescante. [dieciséis]

Aplicaciones médicas, farmacéuticas y de cuidado personal Editar

La glicerina es levemente antimicrobiana y antiviral y es un tratamiento aprobado por la FDA para las heridas. La Cruz Roja informa que una solución de glicerina al 85% muestra efectos bactericidas y antivirales, y las heridas tratadas con glicerina muestran una inflamación reducida después de aproximadamente 2 horas. Debido a esto, se usa ampliamente en productos para el cuidado de heridas, incluidas las láminas de hidrogel a base de glicerina para quemaduras y otros cuidados de heridas. Está aprobado para todo tipo de cuidado de heridas, excepto quemaduras de tercer grado, y se usa para empacar la piel del donante que se usa en injertos de piel. No existe un tratamiento tópico aprobado para quemaduras de tercer grado, por lo que esta limitación no es exclusiva de la glicerina. [17]

El glicerol se usa en preparaciones médicas, farmacéuticas y de cuidado personal, a menudo como un medio para mejorar la suavidad, proporcionar lubricación y como humectante.

La ictiosis y la xerosis se han aliviado con el uso tópico de glicerina. [18] [19] Se encuentra en inmunoterapias con alérgenos, jarabes para la tos, elixires y expectorantes, pasta de dientes, enjuagues bucales, productos para el cuidado de la piel, crema de afeitar, productos para el cuidado del cabello, jabones y lubricantes personales a base de agua. En formas de dosificación sólidas como tabletas, el glicerol se usa como agente de sujeción de tabletas. Para el consumo humano, la FDA de EE. UU. Clasifica el glicerol entre los alcoholes de azúcar como macronutriente calórico. El glicerol también se usa en bancos de sangre para preservar los glóbulos rojos antes de congelarlos.

El glicerol es un componente del jabón de glicerina. Se agregan aceites esenciales para darle fragancia. Este tipo de jabón es utilizado por personas con piel sensible y que se irrita fácilmente porque previene la sequedad de la piel con sus propiedades hidratantes. Atrae la humedad a través de las capas de la piel y ralentiza o previene el secado y la evaporación excesivos. [ cita necesaria ]

Tomado por vía rectal, el glicerol funciona como un laxante al irritar la mucosa anal e inducir un efecto hiperosmótico, [20] expandiendo el colon al extraer agua para inducir la peristalsis que resulta en la evacuación. [21] Puede administrarse sin diluir como supositorio o como un enema de pequeño volumen (2 a 10 ml). Alternativamente, se puede administrar en una solución diluida, por ejemplo, al 5%, como un enema de gran volumen. [22]

Tomado por vía oral (a menudo mezclado con jugo de frutas para reducir su sabor dulce), el glicerol puede causar una disminución rápida y temporal de la presión interna del ojo. Esto puede ser útil para el tratamiento de emergencia inicial de la presión ocular muy elevada. [23]

El glicerol también se ha incorporado como un componente de las formulaciones de tintas biológicas en el campo de la bioimpresión. [24] El contenido de glicerol actúa para agregar viscosidad a la tinta biológica sin agregar moléculas grandes de proteínas, carbohidratos o glicoproteínas.

Extractos botánicos Editar

Cuando se utiliza en extracciones con el método de "tintura", específicamente como una solución al 10%, el glicerol evita que los taninos precipiten en extractos etanólicos de plantas (tinturas). También se utiliza como una alternativa "sin alcohol" al etanol como disolvente en la preparación de extracciones de hierbas. Es menos extractivo cuando se utiliza en una metodología de tintura estándar. Las tinturas a base de alcohol también pueden eliminar el alcohol y reemplazarlo con glicerol por sus propiedades conservantes. Dichos productos no están "libres de alcohol" en un sentido científico o reglamentario de la FDA, ya que el glicerol contiene tres grupos hidroxilo. Los fabricantes de extractos fluidos a menudo extraen hierbas en agua caliente antes de agregar glicerol para hacer gliceritas. [25] [26]

Cuando se usa como un solvente de extracción botánico primario "verdadero" sin alcohol en metodologías sin tintura, se ha demostrado que el glicerol posee un alto grado de versatilidad extractiva para productos botánicos, incluida la eliminación de numerosos constituyentes y compuestos complejos, con un poder de extracción que puede rivalizar con el de las soluciones de alcohol y agua-alcohol. [27] Que el glicerol posea un poder de extracción tan alto supone que se utiliza con metodologías dinámicas (es decir, críticas) en contraposición a las metodologías pasivas estándar de "tintura" que se adaptan mejor al alcohol. El glicerol posee la propiedad intrínseca de no desnaturalizar o volver inertes los componentes de un botánico como lo hacen los alcoholes (es decir, alcohol etílico (grano), alcohol metílico (madera), etc.). El glicerol es un agente conservante estable para extractos botánicos que, cuando se utiliza en concentraciones adecuadas en una base de disolvente de extracción, no permite invertir o mitigar [Redox | reducción-oxidación]] de los componentes de un extracto terminado, incluso durante varios años. [ cita necesaria ] Tanto el glicerol como el etanol son agentes conservantes viables. El glicerol es bacteriostático en su acción y el etanol es bactericida en su acción. [28] [29] [30]

Líquido de cigarrillo electrónico Editar

La glicerina, junto con el propilenglicol, es un componente común del e-líquido, una solución que se usa con vaporizadores electrónicos (cigarrillos electrónicos). Este glicerol se calienta con un atomizador (una bobina de calentamiento a menudo hecha de alambre Kanthal), produciendo el aerosol que entrega nicotina al usuario. [31]

Anticongelante Editar

Al igual que el etilenglicol y el propilenglicol, el glicerol es un kosmotropo no iónico que forma fuertes enlaces de hidrógeno con las moléculas de agua, compitiendo con los enlaces de hidrógeno agua-agua. Esta interacción interrumpe la formación de hielo. La temperatura mínima del punto de congelación es de aproximadamente -36 ° F (-38 ° C) correspondiente al 70% de glicerol en agua.

El glicerol se usó históricamente como anticongelante para aplicaciones automotrices antes de ser reemplazado por etilenglicol, que tiene un punto de congelación más bajo. Si bien el punto de congelación mínimo de una mezcla de glicerol y agua es más alto que el de una mezcla de etilenglicol y agua, el glicerol no es tóxico y se está reexaminando para su uso en aplicaciones automotrices. [32] [33]

En el laboratorio, el glicerol es un componente común de los disolventes para reactivos enzimáticos almacenados a temperaturas inferiores a 0 ° C debido a la depresión de la temperatura de congelación. También se utiliza como crioprotector cuando el glicerol se disuelve en agua para reducir el daño de los cristales de hielo a los organismos de laboratorio que se almacenan en soluciones congeladas, como hongos, bacterias, nematodos y embriones de mamíferos.

Intermedio químico Editar

El glicerol se usa para producir nitroglicerina, que es un ingrediente esencial de varios explosivos como la dinamita, la gelignita y propelentes como la cordita. La dependencia de la fabricación de jabón para suministrar el coproducto de glicerol dificultó el aumento de la producción para satisfacer la demanda en tiempos de guerra. Por lo tanto, los procesos de glicerol sintético fueron prioridades de defensa nacional en los días previos a la Segunda Guerra Mundial. La nitroglicerina, también conocida como trinitrato de glicerilo (GTN), se usa comúnmente para aliviar angina de pecho, tomado en forma de tabletas sublinguales, parches o como aerosol.

Una oxidación de glicerol produce ácido mesoxálico. [34] La deshidratación del glicerol produce hidroxiacetona.

Amortiguación de vibraciones Editar

El glicerol se utiliza como relleno de manómetros para amortiguar las vibraciones. Las vibraciones externas, de compresores, motores, bombas, etc., producen vibraciones armónicas dentro de los manómetros Bourdon que pueden hacer que la aguja se mueva excesivamente, dando lecturas inexactas. El balanceo excesivo de la aguja también puede dañar los engranajes internos u otros componentes, provocando un desgaste prematuro. El glicerol, cuando se vierte en un medidor para reemplazar el espacio de aire, reduce las vibraciones armónicas que se transmiten a la aguja, aumentando la vida útil y la confiabilidad del medidor. [35]

Usos de nicho Editar

Industria cinematográfica Editar

La industria cinematográfica utiliza glicerol cuando se filman escenas que involucran agua para evitar que las áreas se sequen demasiado rápido. [36]

Se usa glicerina, combinada con agua (aproximadamente en una proporción de 1:99), para crear un ambiente suave y ahumado. La solución se vaporiza y se empuja a la habitación con un ventilador.

Acoplante ultrasónico Editar

El glicerol a veces se puede usar como reemplazo del agua en las pruebas ultrasónicas, ya que tiene una impedancia acústica favorablemente más alta (2.42MRayl frente a 1.483MRayl para el agua) mientras que es relativamente seguro, no tóxico, no corrosivo y de costo relativamente bajo. [37]

Combustible de combustión interna Editar

El glicerol también se utiliza para alimentar generadores diésel que suministran electricidad para la serie de autos de carrera eléctricos FIA Formula E. [38]

Investigación de usos Editar

Se han realizado investigaciones para producir productos de valor agregado a partir de glicerol obtenido de la producción de biodiésel. [39] Ejemplos (aparte de la combustión de glicerol residual):

    la producción de gas [40] es un posible aditivo de combustible. [41]
  • El glicerol es uno de los aditivos más utilizados para termoplásticos de almidón. [42] [43]
  • Conversión en propilenglicol [44]
  • Conversión a acroleína [45] [46]
  • Conversión a etanol [47]
  • Conversión en epiclorhidrina, [48] materia prima para resinas epoxi.

El glicerol es un precursor de la síntesis de triacilgliceroles y de fosfolípidos en el hígado y el tejido adiposo. Cuando el cuerpo utiliza la grasa almacenada como fuente de energía, el glicerol y los ácidos grasos se liberan al torrente sanguíneo.

El glicerol se metaboliza principalmente en el hígado. Las inyecciones de glicerol se pueden usar como una prueba simple para detectar el daño hepático, ya que su tasa de absorción por el hígado se considera una medida precisa de la salud del hígado. El metabolismo del glicerol se reduce tanto en la cirrosis como en la enfermedad del hígado graso. [49] [50]

Los niveles de glicerol en sangre son muy elevados durante la diabetes y se cree que es la causa de la reducción de la fertilidad en pacientes que padecen diabetes y síndrome metabólico. Los niveles de glicerol en sangre en pacientes diabéticos promedian tres veces más que los controles sanos. Se ha descubierto que el tratamiento directo de los testículos con glicerol provoca una reducción significativa a largo plazo del recuento de espermatozoides. Se abandonaron las pruebas adicionales sobre este tema debido a los resultados inesperados, ya que este no era el objetivo del experimento. [51]

El glicerol circulante no glica las proteínas como lo hacen la glucosa o la fructosa, y no conduce a la formación de productos finales de glicación avanzada (AGE). En algunos organismos, el componente de glicerol puede entrar directamente en la vía de la glucólisis y, por tanto, proporcionar energía para el metabolismo celular (o, potencialmente, convertirse en glucosa a través de la gluconeogénesis).

Antes de que el glicerol pueda entrar en la vía de la glucólisis o la gluconeogénesis (dependiendo de las condiciones fisiológicas), debe convertirse en su intermedio gliceraldehído 3-fosfato en los siguientes pasos:


¿Cuál es la vida útil de las tres vacunas?

La vida útil de la vacuna Pfizer depende en gran medida de la temperatura a la que se almacena. Todas las vacunas de Pfizer se enviarán en contenedores térmicos especiales, que mantendrán una temperatura de -70 grados centígrados y se pueden usar como unidades de almacenamiento temporal rellenándolas con hielo seco cuando sea necesario. La vacuna se puede almacenar en estos recipientes hasta por 30 días.

Almacenada en los refrigeradores que se encuentran comúnmente en hospitales y farmacias, la vacuna puede durar cinco días, suponiendo que las temperaturas se mantengan entre 2 y 8 grados Celsius. Esto puede dar a las vacunas COVID almacenadas en los contenedores temporales y luego trasladadas a los refrigeradores una vida útil de 35 días. A mediados de mayo de 2021, la Agencia Europea de Medicamentos dijo que las dosis de Pfizer podrían refrigerarse durante 30 días en lugar de los cinco originales.

A "temperaturas ultrabajas", las dosis de la vacuna Pfizer pueden durar hasta seis meses. Sin embargo, una vez descongeladas, las vacunas no se pueden volver a congelar y almacenar. Para asegurarse de que ninguna vacuna se almacene incorrectamente y pierda su viabilidad, Pfizer tiene la intención de utilizar "sensores térmicos con GPS", que rastrearán la temperatura de cada envío y permitirán a Pfizer "prevenir de manera proactiva las desviaciones no deseadas y actuar antes de que sucedan", según al sitio web de Pfizer.

A fines de febrero, la FDA dijo que la vacuna Pfizer, que fue aprobada para niños de 12 a 15 años a mediados de mayo, podría almacenarse a temperaturas estándar de congelación hasta por dos semanas. Unos meses más tarde, el CEO de Pfizer, Albert Bourla, dijo que la compañía estaba trabajando en una nueva versión de la vacuna que podría almacenarse durante seis meses a temperaturas normales de refrigerador.

La vacuna Moderna depende de manera similar de las temperaturas bajo cero para mantener la viabilidad. La vacuna debe mantenerse a la misma temperatura que la vacuna Pfizer: entre 2 y 8 grados Celsius (o 36-46 grados Fahrenheit). Se mantendrá estable a estas temperaturas durante tres meses (originalmente, la compañía dijo que solo podría durar 30 días a esas temperaturas). A temperatura ambiente, la vacuna seguirá siendo viable hasta por 12 horas.

A temperaturas bajo cero, la vacuna Moderna se puede almacenar hasta por seis meses.

Si las vacunas están descongelado y luego no puede & # 8217t ser utilizado en su ubicación actual, sin embargo, los estados están tratando de reubicar esas dosis para que puedan administrarse a las personas antes de que caduquen. O eso, o las personas que no serían un paciente prioritario han calificado la vacuna por estar en el lugar correcto en el momento correcto.

Durante las tormentas invernales de Texas a mediados de febrero, un corte de energía cerró una instalación que almacena más de 8,000 dosis de la vacuna Moderna. Los funcionarios lograron vacunar a más de 5,000 personas durante las siguientes 12 horas, y para el resto de las dosis, Moderna brindó pautas específicas para que pudieran ser refrigeradas y mantenidas a salvo.

Mientras tanto, la vacuna Johnson & amp Johnson, que fue aprobada para los EE. UU. En febrero y que solo requiere una dosis única, no requiere temperaturas ultracongeladas para su almacenamiento. Según Johnson & amp Johnson, la vacuna & # 8220 es compatible con los canales estándar de almacenamiento y distribución de vacunas con facilidad de entrega a áreas remotas. Se estima que la vacuna se mantendrá estable durante dos años a -4 ° F (-20 ° C) y un máximo de tres meses en refrigeración de rutina a temperaturas de 36-46 ° F (2 a 8 ° C).

Pero si las vacunas se descongelan y luego caducan antes de que encuentren el brazo de alguien, y eso fue una gran preocupación en Ohio en junio, cuando estaban programadas para caducar 200.000 dosis de Johnson & amp Johnson, esto es lo que sucede con las dosis no utilizadas.

A mediados de junio de 2021, con varios estados preocupados de que sus dosis de Johnson & amp Johnson caduquen antes de que puedan usarse, el Dr. Anthony Fauci dijo que la FDA estaba tratando de determinar si las fechas de vencimiento podrían ajustarse o extenderse.


¿Cómo se cumplirán estas demandas de almacenamiento?

Keating anticipa que estos requisitos complicarán significativamente la distribución de BNT162b2. Para garantizar la eficacia de la vacuna, según Keating, las personas deberán vacunarse en "lugares centralizados con acceso a congeladores de menos 80 grados Celsius" o contenedores de hielo seco.

Pero este equipo requiere un alto mantenimiento en sí mismo. Los contenedores de hielo seco deben "reponerse con regularidad y el suministro de hielo seco puede resultar difícil de mantener", dice Keating.

Pfizer se ha adelantado a las críticas al diseño de BNT162b2 al desarrollar y fabricar unidades de almacenamiento diseñadas específicamente para la vacuna. Aproximadamente del tamaño de una maleta, estas unidades pueden llevar al menos 975 dosis y están empacadas con suficiente hielo seco "para recargarlo una vez más", Jessica Atwell, PhD, científica asistente en la división de epidemiología y control de enfermedades globales en el departamento. de salud internacional en la Escuela de Salud Pública Johns Hopkins Bloomberg, dice Verywell.

Sin embargo, no será posible enviarlos a todo el mundo.

"Hacer eso en países de ingresos altos como EE. UU. Es una cosa", dice Atwell. "Tratar de hacer eso en países de ingresos bajos y medianos de todo el mundo donde incluso una temperatura normal de 2 a 8 grados C, similar a la de un refrigerador, puede ser realmente difícil en muchas partes del mundo. Así que definitivamente es un desafío de implementación ".

Quizás el mayor obstáculo para la distribución generalizada de una vacuna que debe mantenerse tan fría como BNT162b2: no tiene precedentes. "Actualmente no usamos ninguna [vacuna] que requiera menos de 70 grados de almacenamiento", dice Atwell.


3. Interacciones proteína-proteína y proteína-ADN

Una tarea importante para descifrar la función de la proteína es la identificación de otras entidades con las que interactúa. A pesar de que C. elegans no ha sido explotado como organismo para análisis bioquímicos, es claramente susceptible de tales estudios. A continuación se muestran los protocolos que describen la inmunoprecipitación (IP) y la inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) que deben servir como pautas generales para en vivo estudios de interacción en C. elegans . Estas interacciones a menudo se pueden confirmar mediante estándares in vitro técnicas tales como dos híbridos, estudios de reducción de GST y ensayos de cambio de movilidad de electroforesis (EMSA).

Protocolo 16: Inmunoprecipitación de lisados ​​de embriones (Ray Chan y Barbara Meyer)

Siembra de cultivo asincrónico de gusanos líquidos

Flotar los gusanos adultos de las placas NGM de 9 cm con 5 ml de M9. Se necesitarán aproximadamente 6 & # 82118 placas saturadas con una población asincrónica de gusanos, pero no hambrientos, para sembrar cada litro de cultivo líquido.

Agregue 10 & # 821115 ml de HB101 saturado y controle el suministro de alimentos al menos una vez al día. Coloque 1 gota de cultivo en una placa NGM de 5 cm y deje que el líquido se evapore durante aproximadamente 1 & # 82112 minutos hasta que los gusanos puedan arrastrarse. Si hay suficiente comida, las lombrices no deben esparcirse ni buscar comida. Alternativamente, los gusanos hambrientos parecen algo translúcidos.

Cosechando cultura asincrónica y sembrando culturas sincrónicas

Filtre el cultivo a través de un miracloth de 35 y # 956 m (Calbiochem) para recolectar hermafroditas grávidos.

Lavar con aproximadamente 0,5 L de dH2O.

Trate cada litro de cultivo con 100 ml de solución de lejía alcalina recién preparada. Mezcle en una placa de agitación durante 5 & # 821110 minutos (para gusanos mutantes, puede ser aconsejable blanquear durante menos de 5 minutos). Detenga el proceso de blanqueamiento cuando los gusanos adultos comiencen a abrirse.

Solución de lejía alcalina (100 mL):
75 ml de H2O
20 ml de lejía comercial
5 ml de NaOH 10 N

Pesar un tubo de centrífuga cónico de 250 ml. Registre el peso __________ g.

Centrifugue los gusanos blanqueados a 1 & # 82112.000 rpm en una centrífuga de mesa. Detenga la centrífuga tan pronto como la velocidad alcance las 2000 rpm. (El rotor tarda varios minutos en detenerse por completo).

Resuspenda el gusano en M9 y centrifugue como en el paso 5. Repita este paso de lavado una vez más para un total de dos lavados M9.

Pesar el tubo de centrífuga con los embriones lavados.

Peso combinado de tubo de centrífuga y embriones __________ g.

Peso de los embriones __________ g.

Siembre de 0,5 a 2 gramos de embriones por 1 L de medio S-basal completo. Generalmente use 0.5 & # 82111 g para N2 y 1 & # 82112 g para gusanos mutantes. Permita que los embriones eclosionen durante la noche sin comida y alimente a las larvas L1 sincronizadas al día siguiente.

Lavar los embriones no utilizados en tampón de homogeneización, resuspender en 1 ml de tampón de homogeneización por gramo de embrión y almacenar en un congelador & # 8722 a 80 & degC.

Todos los pasos se realizan a 4 ° C.

Descongele 10 & # 821115 mL de embriones congelados en tampón de homogeneización.

Colocar el tubo en hielo y someterlo a ultrasonidos con diez ráfagas de 30 segundos al 15% de potencia en un sonicador Heat System XL2020 con una micropunta cónica estándar (cat. # 419, 3 mm de diámetro). Espere 1 minuto entre ráfagas para que se enfríe.

Pellet de desechos por centrifugación a 6.500 rpm (5.000 y veces g) en un rotor SS-34 durante 20 minutos. Recoja el sobrenadante en un tubo limpio de 50 ml.

Sonicar como se describe en el paso 2 para cortar el ADN. Pellet de desechos por centrifugación a 14.500 rpm (25.000 y veces g) en un rotor SS-34 durante 20 minutos. Recolecte y congele rápidamente el sobrenadante en alícuotas de 0.5 & # 82111 mL.

Todos los pasos se realizan a 4 ° C.

Descongele los lisados ​​de embriones en hielo. Incube los lisados ​​con perlas de proteína A Sepharaose (100 & # 956L por ml de lisados ​​Amersham) o IgGsorb (100 & # 956L por ml de lisados ​​The Enzyme Center) durante 10 & # 821130 minutos. Girar en una microcentrífuga durante 2 min. a las 500 y veces gramo para sedimentar las perlas de Sepharose o IgGsorb. Transferir el sobrenadante a un nuevo tubo de microcentrífuga y girar en una microcentrífuga a velocidad máxima durante 10 min. Utilice el sobrenadante para IP.

Incubar aproximadamente 5 & # 956 g de anticuerpos purificados por afinidad con 3 mg de proteína total de lisados ​​de embriones durante 2 horas. Lleve el volumen final hasta 1.0 a 1.4 mL usando tampón ChIP con 140 mM KCl.

Pellet precipitados inespecíficos girando en una microcentrífuga a la velocidad máxima (aproximadamente 16.000 y veces gramo ) durante 10 min.

Transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo de microcentrífuga con 25 & # 956L de proteína A Sepharose y colóquelo en un balancín / nutator durante 30 min.

Pellet los complejos de anticuerpo-antígeno capturados en las perlas de proteína A Sepharose girando en una microcentrífuga durante 2 min. a las 500 y veces gramo . Retire el sobrenadante.

Lave las perlas agregando 1 ml de tampón ChIP y girando en una microcentrífuga durante 2 min. a las 500 y veces gramo . Retire el tampón de lavado. Repita este paso para un total de cuatro lavados.

Eluir hirviendo las perlas con 1 x tampón de muestra SDS y cargar directamente en un gel SDS-PAGE. Alternativamente, incube las perlas con 200 & # 956 L de glicina 0,1 M (pH 3,0) a temperatura ambiente. Pellet las perlas como se describe anteriormente, retire y guarde el sobrenadante. Precipitar el eluato con ácidos tricloroacéticos.

Para conocer las recetas de tampones, consulte el protocolo de inmunoprecipitación de cromatina a continuación.

Protocolo 17: Inmunoprecipitación de cromatina a partir de lisados ​​de embriones (Ray Chan y Barbara Meyer)

Cosecha embriones blanqueando hermafroditas grávidos. [Un rendimiento típico de N2 es 2 & # 82115 gramos de 25 a 30 placas NGM de 9 cm].

Lave los embriones a fondo con 1x M9 para eliminar la solución de lejía alcalina.

Prepare 100 mL de solución de formaldehído [1 x solución M9 con formaldehído al 2% (v / v)]

Lave los embriones una vez en la solución de formaldehído. Aspire la solución de lavado. Agregue una solución fresca de formaldehído a 50 ml y agite suavemente (usando un nutator) a temperatura ambiente durante 30 minutos.

Lave los embriones reticulados una vez con 50 ml de Tris-HCl 0,1 M (pH 7,5), seguido de dos lavados de 50 ml de 1x M9.

Lavar los embriones una vez con tampón de homogeneización. Agregue 1 ml de tampón de homogeneización por gramo de embrión (según la cantidad inicial), congele rápidamente y almacene a & # 8722 80 & degC.

Descongele 10 & # 821115 mL de embriones reticulados y agregue inhibidores de proteasa frescos.

Coloque el tubo en hielo y someterlo a ultrasonidos con diez ráfagas de 30 segundos al 15% de potencia en un sonicador Heat System XL2020 con una micropunta cónica estándar (cat. # 419, 3 mm de diámetro). Espere 1 minuto entre ráfagas para que se enfríe.

Pellet de desechos por centrifugación a 6.500 rpm (5.000 y veces g) en un rotor SS-34 durante 20 minutos. Recoja el sobrenadante en un tubo limpio de 50 ml.

Sonicar como se describe en el paso 2 para cortar el ADN. Pellet debris by centrifugation at 14,500 rpm (25,000 × g) in a SS-34 rotor for 20 minutes. Collect and quick-freeze the supernatant in 0.5𔂿 mL aliquots.

Thaw embryo lysates on ice. Incubate lysates with Protein A Sepharaose beads (100 μL per mL lysates Amersham) or IgGsorb (100 μL per mL lysates The Enzyme Center) for 10󈞊 minutes. Spin in a microcentrifuge for 2 min. at 2,000 × gramo to pellet the Sepharose beads or IgGsorb. Transfer the supernatant to a new microfuge tube and spin in a microcentrifuge at top speed for 10 min. Use the supernatant for IP.

Incubate approximately 5 μg of affinity purified antibodies with 3 mg total protein of embryo lysates for 2 hrs.

Pellet non-specific precipitates by spinning in a microcentrifuge at top speed (approximately 16,000 × gramo ) for 10 min.

Transfer the supernatant to a new microfuge tube with 25 μL of Protein A Sepharose and place on a rocker/nutator for 30 min.

Pellet the antibody-antigen complexes captured on the Protein A Sepharose beads by spinning in a microcentrifuge for 2 min. at 500 × gramo . Remove the supernatant.

Wash the beads as follows:

2x 1-mL of ChIP buffer with 100 mM KCl

2x 1-mL of ChIP buffer with 1 M KCl

Add 200 μL elution buffer [10 mM Tris-HCl (pH8), 1% (w/v) SDS]. Spin to pellet the beads. Transfer eluate to a clean microfuge tube. Repeat elution step once more. Combine the eluates (400 μL total vol).

Add 16 μL of 5 M NaCl and heat overnight at 65°C to reverse the formaldehyde cross-links. [Use a PCR machine with a heated top or a Hybaid oven to avoid condensation at top of the tube].

Adding 8 μL of 0.5 M EDTA and 16 μL of 1 M Tris-HCl (pH 6.8). Mix. Digest proteins with 20 μg of proteinase K (Boehringer Mannheim) for 1 hour at 45°C.

Phenol-chloroform extractions. Add 10󈞀 μg of glycogen. Mix. EtOH precipitate. Resuspend in 100 μL TE.

Buffer Recipes

M9 buffer: 6 g Na2HPO4, 3 g KH2correos4, 5 g NaCl, 0.25 g of MgSO47H2O per liter. Autoclave.

1 M potassium citrate, pH 6.0: Per liter solution, add 268.8 g tripotassium citrate, 26.3 g citric acid monohydrate and adjust pH with KOH. Autoclave to sterilize.

Trace metals solution: Per liter solution, add 1.86 g Na2EDTA, 0.69 g FeSO4·7H2O, 0.2 g MnCl2·4H2O, 0.29 g ZnSO4·7H2O, 0.016g CuSO4. Autoclave to sterilize and store in the dark.

1 M potassium phosphate, pH 6.0: Per liter solution, dissolve 136 g KH2correos4 in 900 mL dH2O and adjust pH with KOH. Autoclave to sterilize.

10 x S basal medium: Per liter solution, add 59 g of NaCl, 500 mL of 1 M potassium phosphate (pH 6), 10 mL of cholesterol (5 mg/mL in EtOH). Autoclave to sterilize. [Note: the cholesterol will not go into solution].

Complete S medium: Per liter, add 100 mL of 10 x S basal medium, 10 mL 1 M potassium citrate (pH 6), 10 mL trace metals solution, 3 mL 1 M MgSO4, 3 mL 1 M CaCl2. Autoclave to sterilize.

Homogenization buffer: 50 mM HEPES-KOH, pH 7.6 1 mM EDTA 140 mM KCl 0.5% NP-40 10% glycerol. Add fresh protease inhibitors (aprotinin, pepstatin A, leupeptin, PMSF) and 5 mM DTT before use.

ChIP buffer: 50 mM HEPES-KOH, pH 7.6 1 mM EDTA 0.05% NP-40. Add KCl to the desired concentration. Add fresh protease inhibitors (aprotinin, pepstatin A, leupeptin, PMSF) and 1 mM DTT before use. [This buffer contains less NP-40 and no glycerol compared to the homogenization buffer].

Protocol 18: Chromatin immunoprecipitation (Johnathan Whetstine and Yang Shi)

This protocol is a modified version of a protocol from Upstate Biotechnologies (www.upstate.com).

Chromatin is isolated from 3×10 5 embryos/ChIP reaction, which equates to no less than 400 μg chromatin per immunoprecipitation (IP). There is no harm in scaling up for cleaner results, especially with poor antibodies.

Adult N2 worms grown on either HB101 or RNAi expressing bacteria are bleached and washed before being immersed and rotated in 1.5% Formaldehyde/M9 buffer for 30 minutes at 16 °C.

Embryos are washed extensively with M9 (at least 3 times) and gently centrifuged. Be careful not to rupture embryos.

Add warm chromatin SDS lysis solution (30 °C Upstate biotechnologies cat. # 20-163) to the embryos (minimum of 3×10 5 embryos per 200 μl solution) and dounce homogonize at least 30 times.

Place the slurry on ice for at least 20󈞊 minutes.

Combine the total amount of embryos or adults and sonicate 25 times per 2ml of extract used for an approximately 500bp smear (15 sec constant, 20% output on some sonicators). Do not over heat or allow to foam excessively. Keep on ice.

Centrifuge the samples, and keep the supernatant for DNA quantification before processing.

Aliquot the supernatant (200 μl) and dilute 10-fold into Dilution buffer (Upstate Biotechnologies cat. # 20-153).

Pre-clear each sample twice with 80 μl of ssDNA/protein A agarose beads from Upstate Biotechnologies (cat. # 16-157).

Incubate samples with the indicated antibody overnight at 4 °C with constant rotation.

The next morning add 60 μl of beads and incubate for 1 hour. Centrifuge and wash the beads once at room temperature with constant rotation with each of the following buffers (Note: You can make these buffers, see Upstate recipe, but I find that the beads are cleaner when these products are used): 1.0 ml High Salt Solution (Upstate Biotechnologies cat. # 20-155), 1.0 ml Low Salt buffer Solution (Upstate Biotechnologies cat. # 20-154), 1.0 ml LiCl Solution (Upstate Biotechnologies cat. # 20-156). After the last wash, the beads are washed three times with 1X TE, pH 8.0, which makes the beads slightly translucent.

Prepare and add fresh elution buffer (1%SDS and 0.1M NaHCO3 250 μl) to the beads at room temperature with constant agitation. Keep the supernatant and repeat this step once more.

Reverse the elution with 0.2 M NaCl for 4 hours at 65 °C.

Treat the samples with proteinase K (10 μl 0.5M EDTA, 20 μl 1M Tris-HCl, pH 6.5, and 2 μl 10mg/ml proteinase K) for 1 hour at 45 °C and then extract with phenol:chloroform:isoamyl alcohol.

Precipitate the extracted solution with 20 μg of yeast tRNA, and resuspend each sample in 50 μl warm 10 mM Tris-HCl, pH 8.0. The samples are now ready for PCR reactions.


Algal spent biomass—A pool of applications

A. Catarina Guedes , . F. Xavier Malcata , in Biofuels from Algae (Second Edition) , 2019

2.3.1 Phospholipids

PLs consist of fatty acids, and a phosphate-containing moiety attached to either glycerol or (the amino alcohol) sphingosine—thus resulting in compounds with fat-soluble and water-soluble regions that are ubiquitous in cell membranes. Glycerol-containing PLs include phosphatidic acid, phosphatidylcholine (PC), phophatidylethanolamine, phosphatidylinositol, and phosphatidylserine. Sphingomyelin (SPH)—a major PL, consisting of sphingosine and PC. PLs and choline have several benefits for human health, as depicted in Table 4 . The level of PLs in various red macroalgae varies from 10% to 21% of total lipids these are largely PC (62%–78%) and PG (10%–23%) [81] .

Dietary PLs act as natural emulsifiers, and as such they facilitate digestion and absorption of fatty acids, cholesterol and other lipophilic nutrients. Algal phopholipids appear to bear a number of advantages relative to fish oils, because they are more resistant to oxidation (rancidity), have higher contents of EPA and DHA, with superior bioavailability, and provide a wider spectrum of health benefits for humans and animals [16] .


ARTIFICIAL INSEMINATION TECHNIQUES

The technique of inseminating a cow is a skill requiring adequate knowledge, experience and patience. Improper AI techniques can negate all other efforts to obtain conception. Semen must be deposited within the tract of the cow at the best location and at the best time to obtain acceptable conception rates. Early methods of AI involved deposition of the semen in the vagina, as would occur in natural mating. Those methods are not satisfactory. Fertility is low and greater numbers of sperm are required. Another method which gained popularity was the "speculum" method. This method is easily learned, but proper cleaning and sterilizing of the equipment is necessary, making it more impractical to inseminate than with the rectovaginal technique which is the most widely used AI method today.

In the recto-vaginal technique a sterile, disposable catheter containing the thawed semen is inserted into the vagina and then guided into the cervix by means of a gloved hand in the rectum. The inseminating catheter is passed through the spiral folds of the cow's cervix into the uterus. Part of the semen is deposited just inside the uterus and the remainder in the cervix as the catheter is withdrawn. Expulsion of the semen should be accomplished slowly and deliberately to avoid excessive sperm losses in the catheter. The body of the uterus is short therefore, care should be taken not to penetrate too deeply which might cause physical injury. In animals previously inseminated, the catheter should not be forced through the cervix since pregnancy is a possibility. Since research data show little variation in conception rates when semen is placed in the cervix, uterine body or uterine horns, some people recommend incomplete penetration of the cervical canal and deposition of semen in the cervix.

The recto-vaginal technique is more difficult to learn and practice is essential for acceptable proficiency but the advantages make this method of insemination more desirable than other known methods. With practice, the skillful technician soon learns to thread the cervix over the catheter with ease. If disposable catheters are used and proper sanitation measures are followed, there is little chance of infection being carried from one cow to another.

Timing of Insemination for Maximum Conception

A frequent question concerning AI is: What time during estrus should cows be bred for greatest chance of conception? Since estrus may last from 10 to 25 hours there is considerable latitude in possible time of insemination. Much research work has been conducted on this subject.

Controlled investigations were conducted by Trim Berger and Davis at Nebraska in 1943. These and other studies show that conception rate is lower when cows are bred prior to mid estrus or later than 6 hours after cessation of estrus (standing heat in this case). Maximal conception is obtained when cows are inseminated between mid estrus and the end of standing estrus, with good results up to 6 hours after estrus.

Success in insemination timing is dependent upon a good heat detection program. In large herds, this means assigning individual responsibility for heat detection and a continued education program for labor. A successful heat detection program and subsequent proper timing of insemination will pay dividends in increasing reproductive efficiency.